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騰騫生物分享實(shí)驗(yàn)室常用六種耐熱DNA聚合酶

  • 發(fā)布日期:2018-01-17      瀏覽次數(shù):2793
    • 耐熱dna聚合酶多應(yīng)用在PCR技術(shù)中。各種耐熱DNA聚合酶均具有5'-3'聚合酶活性,但不一定具有3'-5'和5'-3'的外切酶活性。3'-5'外切酶活性可以消除錯(cuò)配,切平末端;5'-3'外切酶活性可以消除合成障礙。由于上述這些不同,可以將耐熱DNA聚合酶分為三類(lèi):  
      一、普通耐熱DNA聚合酶  
      由一種水生棲熱菌yT1株分離提取出,是發(fā)現(xiàn)的耐熱DNA聚合酶中活性zui高的一種,達(dá)200,000單位/mg。具有5'-3'外切酶活性,但不具有3'-5'外切酶活性,因而在合成中對(duì)某些單核苷酸錯(cuò)配沒(méi)有校正功能。  
      TaqDNA聚合酶還要具有非模板依賴性活性,可將PCR雙鏈產(chǎn)物的每一條鏈3'加入單核苷酸尾,故可使PCR產(chǎn)物具有3'突出的單A核苷酸尾;另一方面,在僅有dTTP存在時(shí),它可將平端的質(zhì)粒的3'端加入單T核苷酸尾,產(chǎn)生3'端突出的單T核苷酸尾。應(yīng)用這一特性,可實(shí)現(xiàn)PCR產(chǎn)物的T-A克隆法。  
      TthDNA聚合酶  
      從ThermusthermophilusHB8中提取而得,該酶在高溫和MnCl2條件下,能有效地逆轉(zhuǎn)錄RNA;當(dāng)加入Mg2+后,該酶的聚合活性大大增加,從而使cDNA合成與擴(kuò)增可用一種酶催化。  
      二、高保真DNA聚合酶  
      pfuDNA聚合酶  
      是從Pyrococcusfuriosis中精制而成的高保真耐高溫DNA聚合酶,它不具有5'-3'外切酶活性,但具有3'-5'外切酶活性,可校正PCR擴(kuò)增過(guò)程中產(chǎn)生的錯(cuò)誤,使產(chǎn)物的堿基錯(cuò)配率極低。PCR產(chǎn)物為平端,無(wú)3'端突出的單A核苷酸。  
      VentDNA聚合酶  
      該酶是從Litoralis棲熱球菌中分離出的,不具有5'-3'外切酶活性,但具有3'-5'外切酶活性,可以去除錯(cuò)配的堿基,具有校對(duì)功能。  
      三、DNA序列測(cè)定中應(yīng)用的耐熱DNA聚合酶  
      BcaBestDNA聚合酶  
      從BacillusCaldotenaxYT-G菌株中提純,并使其5'-3'外切酶活性缺失的DNA聚合酶。它的伸長(zhǎng)性能*;可抑制DNA二級(jí)結(jié)構(gòu)形成,可以得到均一的DNA測(cè)序帶。  
      SacDNA聚合酶  
      從酸熱浴流化裂片菌中分離,無(wú)3'-5'外切酶活性,可用于DNA測(cè)序,但測(cè)序反應(yīng)中ddNTP/dNTP的比率要高。  
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