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淺看植物DNA提取試劑盒從植物培養(yǎng)細(xì)胞中提取基因組DNA

  • 發(fā)布日期:2022-03-27      瀏覽次數(shù):1465
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        植物DNA提取試劑盒是根據(jù)氯化芐法構(gòu)建的,能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。氯芐具有能將含有纖維素等的細(xì)胞壁中的羥基芐基化,從而破壞細(xì)胞壁的特性。本制品利用了氯芐的這一特性,將植物樣品凍結(jié)融解后,再使用PipetTip的尖將植物樣品在Microtube壁上數(shù)次按壓即可破壞細(xì)胞壁。本法與傳統(tǒng)方法相比,省去了液氮研磨等煩瑣步驟,有利于一次性處理大量樣品。而且,本制品經(jīng)過了改良,熱處理時(shí)間只需15分鐘,使用本制品從實(shí)驗(yàn)開始至水相回收只需30分鐘時(shí)間。得到的基因組DNA可以進(jìn)行PCR擴(kuò)增及限制酶處理等。
        植物DNA提取試劑盒從植物材料或植物培養(yǎng)細(xì)胞中提取基因組DNA
        ①按下表稱取適量的新鮮植物材料(如選用的是冷凍干燥植物材料,則用量減半),剪成小塊放入研缽中,加入液氮,待樣品冷凍*后快速、用力研磨至粉末狀。研磨時(shí)應(yīng)間斷加入液氮以防止材料融化。
        *如選取植物的根、種子等樣品時(shí),因其基因組DNA含量很低,需使用超過表格中所示的參數(shù)用量,此時(shí)請分兩管進(jìn)行步驟1~6的實(shí)驗(yàn)操作,在步驟7的操作中再將各管溶液分次加入至同一SpinColumn中過濾,使各管的基因組DNA結(jié)合到同一個(gè)SpinColumn上。
        如從培養(yǎng)的植物細(xì)胞中提取基因組DNA,請離心收集2×103~1×107的培養(yǎng)植物細(xì)胞,加入150μl水充分懸浮細(xì)胞后移入研缽中,加入液氮后快速、用力研磨至粉末狀。
        注)樣品研磨應(yīng)充分,否則將會(huì)嚴(yán)重影響基因組DNA的收率。
        ②將研缽移至65℃水浴,當(dāng)樣品粉末剛開始融化時(shí),向研缽中加入700μl的SolutionA和1.2μl的RNaseA1,用力碾磨30秒。
       ?、凼占?50μl研磨好的組織勻漿移至CollectionTube中。如勻漿體積不足650μl,請補(bǔ)充SolutionA至650μl。65℃保溫15分鐘。
        注)處理富含纖維的根/莖等植物材料或富含淀粉、蛋白質(zhì)的種子等時(shí),可延長水浴時(shí)間至60分鐘。
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